Bruselloz tanısı sorun mu ?
Brucellacapt , bruselloz tanısında benzersiz çözüm sunar.
Klinisyen için, Akut Bruselloz tanısı biraz sıkıntı yaratır . Fakat Kronik Bruselloz ayrı bir sorundur.
Bruselloz vakaları toplumda umulandan daha fazladır ve kronikleşme oranı yüksektir.
Brusellozlu hastaların yaklaşık % 30'unda ciddi organ tutulumları ve komplikasyonlar gelişmektedir.
Aşağıda,incelenen 530 Bruselloz vakasında lokal tutulumların %'si verilmiştir.
Osteoartiküler % 21
Genitoüriner % 5
Hepatik % 2.5
Nörolojik % 2
Kardiovasküler % 1.5
Tanı :
Rose Bengal testi çözüm mü?
Primer infeksiyonda Rose Bengal ve tüp aglütinasyon testi gerekli yanıtı sağlar.
Kronik infeksiyonlarda, tekrarlamalarda ve endemik bölgelerde, brusellaya karşı oluşan antikor seviyesi artar.Bu vakalarda, artan antikorların çoğu aglütinasyon göstermeyen IgG antikorlarıdır ( blokan antikorlar,inkomplet antikorlar) ve bu antikorlar Coombs testi veya Enzim immunoassay ile belirlenirler. Rose Bengal testi bu olgularda negatif olarak sonuç verebilir. Tüp aglutinasyon testinde blokan antikorlar nedeniyle ya düşük titrede pozitiflik ya da negatif sonuç alınır.
AGLUTİNANT ANTİKORLAR NON AGLUTİNANT ANTİKORLAR
( IgG+IgA+IgM) ( IgG+IgA )
Akut Hastalarda Kronik Hastalarda
Brucellacapt testi ,standart tüp aglütinasyon testi ve Coombs testini bir arada sunan benzersiz bir yöntemdir. Brucellacapt yönteminde, kuyucuklar insan kaynaklı IgG,IgM,IgA antikorlarlarına karşı antikorlarla ( Coombs antikorları) kaplıdır.
Brusellaya karşı oluşan üç antikoru da tespit eder
Standart tüp aglütinasyon testi ile yapılan çalışmalarda düşük titrelerde aglütinasyon veren (1/20,1/40) veya
negatif sonuç veren hasta örnekleri Coombs testi ve Brucellacapt ile yüksek titrelerde ( 1/640,1/1280,1/2560 ) sonuç verebilmektedir.
Bu durum, kronik hastalarda oluşan antikorların büyük çoğunluğunun blokan antikor özelliğinde olduğunu ortaya koymaktadır. Türkiye bruselloz açısından endemik bir ülkedir.Ülkemizde tanısı konulamamış birçok bruselloz vakası, farklı hastalık teşhisleri ile yanlış tedaviye maruz kalmaktadır. Bu nedenle bruselloz tanısında yalancı negatifliğin engellenmesi Türkiye için ayrı bir önem kazanmaktadır. Brucellacapt, kuyucuklarda gerçekleşen bir Coombs'lu brusella aglütinasyon testidir.Tüp aglütinasyon testi ile benzer çalışmaya sahiptir.Gece boyu inkübasyonu vardır.Sonuçlar gözle değerlendirilir.İncelenen serumda brusella antikorları yoksa antijenler duvara bağlanmadan dibe çöker ve mavi nokta şeklinde görülür.Serumda brusella antikorları varsa antijenler duvardaki antikorlar tarafından tutulur ve homojen bir mavilik gözlenir. Brucellacapt, Rose Bengal veya tüp aglütinasyon testi ile pozitif bulunan vakalar için bir doğrulama testi değildir. Tam tersi olarak, belirtilen testler ile yakalanamayan bruselloz vakalarını tespit eder. Rose Bengal veya tüp testi ile pozitif çıkan olgular Brucellacapt testinde de pozitif çıkacaktır ( daha yüksek titrelerde ).
Brucellacapt kit içeriği:
2 tane 96 kuyucuklu pleyt
Pozitif kontrol
Negatif kontrol
Dilüent
Brucella antijeni
Tarama testi olarak her hasta için 2 kuyu kullanılması önerilmektedir. Bir kutu, 96 hasta için tarama amacıyla kullanılabilmektedir. İlk kuyu için 1/160 , ikinci kuyu için 1/320 dilüsyon kullanılır . Her iki kuyuda da negatif çıkan serum örnekleri negatif olarak kabul edilir. Her iki kuyuda da pozitif çıkan serum örnekleri için daha yüksek dilüsyonlar yapılabilir. 1/160 pozitif, 1/320 negatif olarak çıkan serum örnekleri şüpheli olarak kabul edilir ve 4-7 gün sonra hastadan yeni serum örneği alınarak test tekrar edilir.
Kit hem tarama testi olarak hem de titrasyon amacıyla kullanılabilir.Tarama testi yapıldığında her hasta için iki kuyu kullanılacak ve maliyeti düşük olacaktır . Sadece pozitif çıkan hastalara dilüsyon uygulanacağından dolayı ( % 5-7) toplamda hasta maliyetleri fazla etkilenmeyecektir.
Aşağıda Brucellacapt, Coombs ve Standart Tüp Aglütinasyon testi ile yapılan çalışmalar görülmektedir
* Journal of Clinical Microbiology,Nov.2000,p.4000-4005
Tüp aglütinasyon testi ve Coombs testi için pozitiflik sınırı 1/160 ve üstü , Brucellacapt için 1/320 ve üstü olarak alınmıştır.
Baçlangıç serumlarında, her üç çalışmada benzer sonuçlar alınmasına rağmen ,uzun dönem tekrarlamalarda tüp aglütinasyon testinin performansında düşme görülmektedir .
Coombs testi ve Brucellacapt uyumlu sonuç vermektedir.
Coombs testi ile sadece IgG antikorları ,Brucellacapt ile total antikorlar tespit edildiği için Brucellacapt titrasyonları Coombs testine göre yüksek çıkmaktadır.
Brucellacapt Test Prosedürü
Tarama yöntemi
1- Tarama amacıyla 1/160 ve 1/320 dilüsyonlar önerilir.
2- Eğer pozitif ise 1/320 den başlayarak titrasyon sürdürülür.
3- Bütün reaktifleri kullanmadan önce oda sıcaklığına getirin ( 18-25°C ).
4- Kullanacağınız sayıda stripi folyodan çıkarın. Her hasta için iki kuyu kullanılacak şekilde striplerinizi ayarlayın.
5- Hasta serumunu bir tüpte, dilüent ile 1/40 oranında sulandırın ( 200 ml dilüent,5 ml serum).
6- Stripte ayırdığınız birinci kuyuya ve ikinci kuyuya 50 ml diluent koyun . Tüpte dilüe ettiğiniz serum örneğinden birinci kuyuya 50 ml ilave edin , karıştırın ve birinci kuyudan 50 ml alarak ikinci kuyuya transfer edin. İkinci kuyuda karıştırın 50 ml karışımı dışarı atın.
7- Birinci ve ikinci kuyudaki karışımların üzerine 50 ml Brucella antijen reaktifinden ekleyin (Brucella antijenini kullanmadan önce iyice karıştırın ).
8- Birinci kuyudaki son karışım 1/160,ikinci kuyudaki son karışım 1/320 olacaktır.
9- Kuyucukların üzerini kutuda bulunan koruyucu bant ile kapatın ve plağı dikkatlice çalkalayın. Kuyucuklarda bulunan sıvının kurumaması ve gerekli reaksiyonun gerçekleşmesi için plağı nemli ortamda 24 saat 37°C'de inkübe edin
(Örnek: Kapağı iyi kapanan ve plağı alabilecek bir kabın dibine ıslak pamuk koyup kapağını kapatarak uygun ortam sağlanabilir).
Titrasyon Yöntemi
1- Çalışılacak sayıda stripi folyodan çıkarın.
2- A kuyusuna 100 ml, diğer kuyulara 50 ml dilüent koyun.
3- A kuyusuna 5 ml serum pipetleyin ve karıştırın. Bu kuyudan 50 ml karışımı alın ve B kuyusuna pipetleyin karıştırın .B'den 50ml alın C'ye pipetleyin...En son kuyudan 50 ml dışarı atın.Bu şekilde istenen titrede dilüsyon gerçekleşir.
4- Bütün kuyulara 50 ml Brucella antijeni ilave edin.
5- Kuyucukların kuyusu 1/40, B kuyusu 1/80,C kuyusu 1/160...H kuyusu 1/5120 olacaktır.üzerini kutuda bulunan koruyucu bant ile kapatın ve plağı dikkatlice çalkalayın. Kuyucuklarda bulunan sıvının kurumaması ve gerekli reaksiyonun gerçekleşmesi için plağı nemli ortamda 24 saat 37°C'de inkübe edin.
Son titrasyon A kuyusu 1/40, B kuyusu 1/80,C kuyusu 1/160...H kuyusu 1/5120 olacaktır.
Literatürler :
Citation: Clinical Microbiology and Infection Vol 6, Suppl. 1 May 2000, page 166
Brucellacapt: A new method immunecapture-agglutination test for the diagnosis of human brucellosis
A. Orduña, A. Prado, M.P. Gutierrez, A. García-Pascual, M. Cuervo, R. Abad, A. Dueñas, M.A. Bratos
Dpto Microbiología/Unidad de Investigación, Hospital Universitario, Lab Regional Brucelosis, Servicio Territorial Salud Publica, Valladolid , Spain
Among the techniques used for the diagnosis of human brucellosis, tube agglutination (SAT) and Coombs test are most often used. The convenience of using Brucellacapt, a new and easier serological test for the diagnosis of human brucellosis based on immunecapture-agglutination of total anti-Brucella antibodies, is studied.
Material and Methods. Eight hundred and eighty four sera from differente groups of patients were studied (315 evolutive sera from 82 patients, 157 sera from patients in whom brucellosis was suspected but could not confirmed and 412 sera from healthy people from endemic region of brucellosis). SAT, the Coombs test (Linear Chemicals, Spain ) and Brucellacapt ( Vircell , Spain ) were performed according to manufacturer's instructions
Results: All the initial sera from the 82 patients proved to be positive in Brucellacapt and Coombs test, while only 75 (91.4%) were positive in the SAT. If a1/160 diagnostic treshold titer is defined for Brucellacapt, Coombs and SAT The sensitivity of the tests was 95.1, 91.5 and 65.8 and the specificity was 99.0, 99.8 and 100% respectively. Comparing Brucellacapt with Coombs or SAT as gold standard the area below of the ROC curve for Brucellacapt is 0.980 (95% IC 0.968-0988) and 0.971 (95%IC 0.958-0.981) respectively. The correlation coefficient between Brucellacapt and Coombs test or SAT were 0.985 (p = 0.000) and 0.866 (p = 0.000) respectively,
Conclusions: There are a very good correlation between Brucellacapt and Combs test even though Brucellacapt ussually shows higher titers than Coombs test.
Citation: Clinical Microbiology and Infection, volume 7, supplement 1, 2001, pages 1-394
Serological follow-up of brucella patients using an immunocapture-agglutination test (Brucellacapt), Coombs anti-Brucella and LPS-ELISA tests
A. Prado, P. Gutierrez, A. Duenas, M.A. Miguel, L. Ruiz, M.A. Mantecon, M.A. Bratos, A. Orduna
Valladolid , E
Introduction: We evaluated a new test for the diagnosis and follow-up of human brucellosis based on immunecapture-agglutination technique (Brucellacapt) compared with seroagglutination test (SAT), Coombs anti-Brucella test and IgG, IgA, and IgM ELISA against smooth lipopolysaccharide (S-LPS) from Brucella melitensis 16 M.
Materials and methods: We studied 82 initial sera from patients with a diagnosis of brucellosis and 277 follow-up sera from 53 patients of brucellosis. Four hundred and twelve sera from people living in rural areas with endemic brucellosis ( Castilla y Leon , Spain ) were included as a control group. Brucellacapt (Vircell, Santa Fe , Granada , Spain ), SAT, Coombs test (Linear Chemicals, Spain ) and IgG, IgA and IgM ELISA against S-LPS from Brucella melitensis were performed for each serum sample. S-LPS was obtained by phenol-water extraction technique (Redfearn method). All sera from the same patient were studied simultaneously. The curve results were expressed as a percent of variation of the logarithm of the inverse of the titers of evolution sera in relation to the titers of corresponding initial sera.
Results: If a >1/160 diagnostic threshold titer was defined for Brucellacapt, SAT, Coombs tests, IgG ELISA, IgA ELISA and IgM ELISA, the sensitivities were 95.1, 65.8, 91.5, 92.6, 89.0 and 85.3%, respectively. For the 412 control sera the specificities were 99.0, 100, 99.8, 97.8, 100 and 100%, respectively. The antibody titers of all serological test decrease after the beginning of the treatment. One year later, the highest titers were obtained by IgG ELISA (90%). The lowest titers were obtained by SAT (66%) and ELISA IgM (70%). The curve of the follow-up titers of Brucellacapt was similar to the Coombs test and the titers persist high one year after treatment.
Conclusions: The study shows very good correlation between the Brucellacapt and the Coombs tests, with a high concordance between titers obtained in the two tests. The evolution of the titers after treatment is very similar in both tests.
J Infect. 2004 Aug;49(2):102-8.
Evaluation of Brucellacapt for the diagnosis of human brucellosis.
Casao MA, Navarro E, Solera J.
Experimental Research Unit, General Hospital of Albacete, c/Hermanos Falco s/n, 02006 Albacete , Spain .
OBJECTIVE: To evaluate the role of Brucellacapt in the diagnosis of human brucellosis, and the correlation with the evolution of the disease. METHODS: Twenty-six patients who were admitted to the General Hospital of Albacete ( Spain ) over a 2-year period and diagnosed with brucellosis were included in the study. One hundred and twenty-three serum samples collected at the time of diagnosis and at intervals during and after treatment were tested by the Coombs test, the standard seroagglutination test (SAT), and Brucellacapt (a new test based on an immunocapture-agglutination technique). To study the specificity of Brucellacapt, sera from 20 patients with other infectious diseases and 20 sera from healthy donors were included in this study. RESULTS: The sensitivity of the Brucellacapt at the moment of diagnosis was similar to the Coombs test (96 and 100%, respectively), somewhat higher than that of SAT (73%). And the specificity of the Brucellacapt (97.5%) was less than SAT and the Coombs test, that was 100%. The correlation between the classical serological tests and Brucellacapt, showed that titers in Brucellacapt and Coombs test of patients were both similar in a range of 1-2 dilutions. The correlation between Brucellacapt and Coombs (r=0.14) and between Brucellacapt and SAT (r=0.0) did not reach statistical significance. However, the correlation coefficient between Coombs and SAT was r=0.8. CONCLUSIONS: Brucellacapt and Coombs tests showed a similar sensitivity and specificity in the diagnosis of human brucellosis. In addition, as Coombs test, Brucellacapt could help to diagnose patients with long evolution of brucellosis that are not detected with SAT.
Enferm Infecc Microbiol Clin. 2001 May;19(5):202-5.
[Can the Brucellacapt test be substituted for the Coombs test in the diagnosis of human brucellosis?]
Serra J, Velasco J, Godoy P, Mendoza J.
Servicio de Analisis Clinicos. Hospital Comarcal del Pallars. Tremp. Lleida.
BACKGROUND: Throughout this work we have studied the capacity of Brucellacapt test to replace Coombs test in the serological diagnosis of human brucellosis. METHODS: A total of 66 initial sera from patients with diagnostic of brucellosis were studied. The patients were divided in two groups: 42 patients showing a primo-infection (group1), and 24 patients with a previous case of brucellosis (group 2). As a controls, for the group 1 we have used 100 sera from healthy donors, and for group 2, 28 sera from people that have had clinical brucellosis but actually are in good health. All serum samples were tested in either Coombs and Brucellacapt tests. The diagnostic yield was calculated using ROC (receiver-operating characteristic) plots.Moreover, the results obtained in Coombs and Brucellacapt tests with 397 serum samples from 66 patients with brucellosis were compare with a non-parametric method. RESULTS: The sensibility and specificity for group1 were respectively 1 and 0.98 for Coombs and, 1 and 0.95 for Brucellacapt tests. For group 2, the results in Coombs test were 1 and 0.80, and in Brucellacapt test 0.95 and 0.74. In this second group, the area under the ROC plot was 0.950 for Coombs and 0.904 for Brucellacapt tests. Non statistical differences were observed comparing both serological tests using the Wilcoxon method (Z= -0.213; p=0.8). CONCLUSIONS: Brucellacapt and Coombs tests yield similar diagnostic results in the follow-up of serological samples from patients with brucellosis, and its should consider as interchangeables.
Enferm Infecc Microbiol Clin. 1999 Jun-Jul;17(6):283-5.
[Comparative study of the Brucellacapt test versus the Coombs test for Brucella]
Gomez MC, Rosa C, Geijo P, Escribano MA.
Seccion de Microbiologia, Hospital Virgen de la Luz, Cuenca .
BACKGROUND: To compare the results obtained by Brucella Coombs' test with those obtained by Brucellacapt. MATERIAL AND METHODS: 145 serum samples from 112 patients with brucellosis or with brucellar infection suspected on clinical grounds and a history of occupational exposure were analyzed. All serum samples were tested for Rose Bengal, agglutinations whenever Rose Bengal was positive, Brucella Coombs' test and Brucellacapt. RESULTS: There was a direct correlation between both methods (p < 0.01). Negative serum samples and most serum samples with titers between 1/40 and 1/2,560 as tested by Brucella Coombs' test showed similar results into a range of one to two dilutions by Brucellacapt. However, serum samples with titres between 1/5,120 and 1/40,960 by Brucella Combs' test yielded also higher titres by Brucellacapt and for this reason we were unable to define a titre. CONCLUSIONS: Brucellacapt is a rapid assay to exclude infection and yield results comparable to Brucella Coombs' test in range 1/40 to 1/2,560. Significantly higher and more rapid titres were obtained in acute brucellosis by Brucellacapt as compared with those obtained by Brucella Coombs' test. Titre's evolutions by Brucellacapt is similar to Brucella Coombs' test. Unfortunately it was difficult the titres definition of Brucellacapt at high titres.
Mikrobiyol Bul. 1992 Jan;26(1):56-60.
[Comparison of the Wright, indirect Coombs and enzyme immunoassay IgG methods for the diagnosis of chronic brucellosis]
Colak H, Usluer G, Ozgunes I, Karaguven B, Barlas S.
Klinik Bakteriyoloji ve Enfeksiyon Hastaliklari Anabilim Dali, Eskisehir .
Incomplete IgG and IgA class immunoglobulins are formed in chronic brucellosis and these antibodies do not detect with classical Wright agglutination test (WAT). However these antibodies are measured with indirect Coombs and enzyme immune assay (EIA) techniques. In this study 90 patients serum samples were tested with WAT, indirect Coombs and EIA. All of the patients had chronic brucellosis. EIA was used to determine the levels of brucella specific IgG antibodies in 44 ( % 48.8) patients whose WATs were negative and indirect Coombs assays were positive and 46 patients whose WATs and indirect Coombs tests were negative. Thirty-seven (84.08%) of the 44 patients whose WAT negative and indirect Coombs positive were found positive for EIA IgG. Sixteen (34.7%) of the 46 patients whose WAT and indirect Coombs negative were found positive EIA IgG. The importance of EIA and indirect Coombs tests was discussed at the diagnosis of chronic brucellosis
Kronik bruselloz teşhisi için Wright, Indirekt Coombs ve Enzyme Immunoassay IgG metodlarının karşılaştırılması
Colak H, Usluer G, Ozgunes I, Karaguven B, Barlas S.
Klinik Bakteriyoloji ve Enfeksiyon Hastalıkları Anabilim Dalı, Eskisehir .
Kronik brusellozda inkomplet IgG ve IgA sınıfı immünoglobülinler oluşur ve bu antikorlar klasik Wright aglütinasyon testi (WAT) ile bulunamaz. Fakat bu antikorlar indirekt Coombs ve enzyme immune assay (EIA) teknikleri ile ölçülebilir. Bu çalışmada 90 hastanın serum örnekleri WAT, indirekt Coombs ve EIA ile test edilmiştir. Bütün hastalar kronik brusellozdur. WAT ile negatif , indirekt Coombs ile pozitif çıkan 44 hasta (%48.8), WAT ve indirekt Coombs testleri negatif çıkan 46 hastanın brusella spesifik IgG antikor seviyelerini saptamak için EIA tekniği kullanılmıştır. WAT negatif, indirekt Coombs testi pozitif çıkan 44 hastanın 37'si (%84.08) EIA IgG ile pozitif bulunmuştur. WAT ve indirekt Coombs sonuçları negatif olan 46 hastanın 16'sı (%34.7) EIA IgG ile pozitif bulunmuştur. Kronik bruselloz teşhisinde EIA ve indirect Coombs testlerinin önemi tartışılmıştır.
|
